核心利用 Tol2-Gateway 系統建立基因轉殖魚模型。此技術結合了 Tol2 轉座子和 Gateway 重組技術,提供快速、模組化的基因轉殖方法。
Tol2-Gateway 系統簡介:
Tol2 是一種來自青鱂魚(Oryzias latipes)的轉座子,能夠在脊椎動物細胞中有效地在基因組中插入特定 DNA 片段。Gateway 技術則利用特定的重組酶,允許研究人員快速且準確地組裝多個 DNA 片段。結合這兩種技術,研究人員可以快速地構建包含啟動子、目標基因和標記基因的轉殖載體,並透過 Tol2 系統將其快速地插入至斑馬魚基因組中。
技術流程:
Tol2-Gateway 系統簡介:
Tol2 是一種來自青鱂魚(Oryzias latipes)的轉座子,能夠在脊椎動物細胞中有效地在基因組中插入特定 DNA 片段。Gateway 技術則利用特定的重組酶,允許研究人員快速且準確地組裝多個 DNA 片段。結合這兩種技術,研究人員可以快速地構建包含啟動子、目標基因和標記基因的轉殖載體,並透過 Tol2 系統將其快速地插入至斑馬魚基因組中。
技術流程:
- 設計並構建包含目標基因的 Gateway 進入載體(Entry Vectors),例如 p5E(啟動子)、pME(編碼序列)和 p3E(3' UTR)。
- 透過 LR 重組反應,將上述進入載體與 Tol2 目的載體(Destination Vector)組合,形成最終的轉殖載體。
- 將轉殖載體與 Tol2 轉座酶 mRNA 共同注射至一細胞期的斑馬魚胚胎。
- 培育胚胎至適當階段,進行基因型分析以確認轉基因的表達。
- 建立穩定的轉基因品系,用於後續研究。